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MTT實驗代測

MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，漢語化學名為 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。是一種黃顏色的染料。MTT法，又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。

MTT實驗代測

服務說明

MTT細胞實驗步驟

1、細胞種板：將對數生細胞用胰蛋白酶消化，配制成濃度為1-10×104個/ml的細胞懸液，按10000細胞／孔接種于96孔板，每孔加100μl，置于CO2（5％）培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)24h以貼壁。

2、加藥處理：繼續(xù)培養(yǎng)0h、12h、24h、36h分別更換為100μl細胞樣品各自對應的含有一定濃度藥物的培養(yǎng)基，對照組更換為含溶劑的培養(yǎng)基，分別記為藥物處理48h、36h、24h、12h。每個樣本濃度設三個重復。

3、MTT反應：所有孔中加入20μl 濃度為5mg/ml的、新鮮配制的MTT溶液，培養(yǎng)箱中孵育4小時，使MTT還原為甲瓚（此時倒置顯微鏡下可看到孔板內的細胞周圍出現絲狀紫色結晶體）。

4、DMSO溶解甲瓚：小心的吸除上清液，每孔加DMSO（二甲基亞砜）150μl，用搖床搖勻。

5、測吸光度值：使用酶標儀測定570nm光吸收值，以溶劑處理細胞為對照組，按公式計算藥物對細胞的抑制率。

抑制率＝1－（實驗組-空孔）/（對照組-空孔）